本产品基于高结合力的磁性粒子的纯化方式。样品在消化液和蛋白酶K作用下分步裂解消化得到DNA和RNA消化液，加入磁性粒子和结合液，DNA或RNA会吸附在磁性粒子的表面，而蛋白质等杂质则不被吸附而去除。吸附了核酸的粒子经洗涤液洗涤去除蛋白质和杂质，经乙醇液洗涤去除盐分，*后DNA被洗脱液EB洗脱，再经过磁性粒子对DNA进行进一步纯化，经乙醇液洗涤去除盐分，*后DNA被超纯水洗脱。
【产品名称】
通用名称：核酸提取或纯化试剂
商用名称：磁珠法游离DNA提取试剂盒
【包装规格】
35人份/盒、50人份/盒
【预期用途】
用于血浆核酸的提取、富集、纯化等步骤。其处理后的产物用于临床体外检测使用。产品组成中不含可与样本特异性结合的抗原、抗体、探针等成分。
【检验原理】
本产品基于高结合力的磁性粒子的纯化方式。样品在消化液和蛋白酶K作用下分步裂解消化得到DNA和RNA消化液，加入磁性粒子和结合液，DNA或RNA会吸附在磁性粒子的表面，而蛋白质等杂质则不被吸附而去除。吸附了核酸的粒子经洗涤液洗涤去除蛋白质和杂质，经乙醇液洗涤去除盐分，*后DNA被洗脱液EB洗脱，再经过磁性粒子对DNA进行进一步纯化，经乙醇液洗涤去除盐分，*后DNA被超纯水洗脱。
【主要组成成份】
表1 试剂组分表
组 分 | 35人份/盒 | 50人份/盒 | 主要成分 |
磁珠液MPG (DSG) | 11 ml | 15ml | 磁珠液 |
蛋白酶K | 140 mg | 200 mg | 重组蛋白酶 |
蛋白酶溶解液 | 7.0 ml | 10 ml | Tris/CaCl2/甘油 |
结合液MLK（DSK) | 245 ml | 2 x180 ml | 异硫氰酸胍/表面活性剂 |
洗涤液MAW1 (DSW1) | 140 ml | 210 ml | 异硫氰酸胍 |
洗涤液MA (DSW2) | 140 ml | 210 ml | Tris/NaCl |
洗脱液EB | 5.0 ml | 7.0 ml | 10mm Tris,pH8.5 |
磁珠MagPure A4 XP (DSBP) | 9.0 ml | 13 ml | 磁珠液 |
Buffer DS | 7.5 ml | 11 ml | 细胞裂解液 |
【储存条件及有效期】
本试剂盒室温运输和保存，有效期18个月。
【准备工作】
● 溶解蛋白酶K: 首次使用该试剂时，加入蛋白酶溶解液至装有干粉状蛋白酶 K试剂瓶中，轻轻颠倒使蛋白酶 K 充分溶解，混匀后于4℃条件下保存。
● 配制洗涤液MA (DSW2)：首次使用该试剂时，根据洗涤液MA (DSW2)试剂瓶的标示量加入相应的无水乙醇，颠倒混匀，室温保存。
● 磁珠液准备：每次使用前，用涡旋振荡器充分震荡混匀磁珠。直至试剂瓶底部没有沉淀物。
● 血浆样本：提取前，血浆在4℃ 16000 g转速下离心10分钟。冷冻血浆应平衡至室温，用涡旋振荡器充分震荡混匀。
● 提前预热电热恒温干燥箱，温度设置为 55℃。
● 样品体积与蛋白酶K/磁珠液MPG (DSG)/结合液MLK (DSK)/ Buffer DS用量的关系
表2 样品体积与试剂组分用量表
样品体积 | 2 ml | 3 ml | 4 ml |
蛋白酶K | 100µl | 150µl | 200µl |
磁珠液MPG (DSG) | 150µl | 225µl | 300µl |
Buffer DS | 100µl | 150µl | 200µl |
结合液MLK (DSK) | 3.5ml | 5.2ml | 7.0 ml |
【手工提取纯化操作】
1. 吸取血浆2~4ml至15ml离心管中，加入100~200µl蛋白酶K（详见表2），颠倒混匀5~6次。加入100~200µl Buffer DS（详见表2），55℃温浴约30分钟，期间颠倒5~6次。室温下放置5分钟至室温。
2. 加入150~300µl磁珠液MPG (DSG)（详见表2）和 3.5~7.0ml 结合液MLK (DSK) （详见表2）颠倒混匀10-15次，室温放置10分钟，期间颠倒混匀5~6次。
3. 将步骤2的离心管置于磁力架上约5分钟，待磁珠完全吸附溶液澄清后，小心吸弃所有上清液。
4. 在步骤3的离心管中加入2ml 洗涤液MAW1 (DSW1)，取下离心管，涡旋10秒，短暂离心。将离心管置于磁力架上1分钟，待磁珠完全吸附溶液澄清后，小心吸弃所有上清液。
5. 重复步骤4一次。
6. 在步骤5的离心管中加入2ml 洗涤液MA (DSW2)，取下离心管，涡旋10秒，短暂离心。将离心管置于磁力架上1分钟，待磁珠完全吸附溶液澄清后，小心吸弃所有上清液。
注意：洗涤液MA (DSW2) 加入前确定已加入无水乙醇。
7. 重复步骤6一次。
8. 取下离心管，短暂离心，将离心管置于磁力架上 1 分钟，待磁珠完全吸附溶液澄清后，吸弃残留液，37℃干燥15~20分钟，至磁珠干燥为止。
9. 在步骤8的离心管中加入135 µl洗脱液EB，涡旋打散磁珠。37℃振荡温育5分钟。将离心管移至磁力架上吸附2分钟，待澄清，移取上清液 125µl至新标记好的1.5ml离心管中。
10. 在步骤9的离心管中加入100µl（0.8倍）磁珠MagPure A4 XP (DSBP) 。用移液枪吸打混匀10次，室温静置3分钟。将离心管移至磁力架上吸附 10 分钟，磁珠完全吸附溶液澄清。
11. 将步骤10的离心管的上清液采用200µl移液枪分两次吸取，每次110µl，小心移取至新的1.5ml离心管中。
12. 在步骤11的1.5ml离心管中，再加入150 µl（1.2倍）的磁珠MagPure A4 XP (DSBP)，用移液枪吸打混匀 10 次，室温静置 3 分钟。将离心管移至磁力架上，吸附 10 分钟。待磁珠完全吸附溶液澄清后，小心吸弃所有上清液。
13. 在步骤12的离心管中，加入 500 µl 80%乙醇，涡旋10秒，短暂离心。将离心管移至磁力架上，吸附30 秒。待磁珠完全吸附溶液澄清后，小心吸弃所有上清液。
14. 重复步骤13一次。小心吸弃所有上清液后，从磁力架上取下离心管，室温干燥 5~10 分钟，至磁珠干燥为止。
15. 在步骤14的离心管中，加入110µl~190 µl超纯水。涡旋10秒。室温静置1分钟。
将步骤15的离心管移至磁力架上，吸附 5~10 分钟，移取上清液100µl~180 µl至新的1.5ml离心管中，即得提取纯化的DNA溶液。
【产品的局限性】
样品提取效率与操作者是否严格按照说明书操作有关。
【产品性能指标】
1. 外观检查：试剂盒应组份完全，包装外观清洁、无泄漏、无破损；标志、标签字迹清楚。
2. 产品性能
提取产量和纯度：按说明书提取添加50µl Low Marker（加入量>1.5μg）的2m1健康人血浆，并使用Qubit微量荧光定量仪和Nanodrop微量紫外分光光度计分别测定其浓度与纯度，DNA 产量＞1.4μg，A260/280的比值应在1.7~1.9。
核酸回收率：按说明书提取添加50µl Low Marker（加入量>1.5μg）的2m1健康人血浆，回收率应≥80%。
【注意事项】
1. 实验开始前请仔细阅读本说明书，本品仅用于体外诊断。
2. 磁珠悬浮液严禁冰冻、离心，否则可能会对磁珠造成不可逆的损害。
3. 为了避免样本中任何潜在的生物危险，检测样品应视为具有传染性物质，避免接触到皮肤和粘膜。标本操作和处理均需符合相关法规要求：卫生部《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》和生态环境部《医疗废物管理条例》。
4. 试剂盒需由受过培训的专业人员使用，实验操作时应穿戴防护服、实验服、手套、护目镜等合适的防护装备。
5. 所有试剂应在规定的环境条件下储存，并在有效期内使用。不恰当的保存条件、操作方式或参数设置均可能导致产品性能下降。
6. 不同批号试剂盒组分不可相互替换使用。
7. 所有试剂、耗材均为一次性使用。所用过的吸头请打入盛有消毒剂的容器，并与废弃物一起灭菌后方可丢弃。
8. 试验用水：符合《GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法》一级水（无DNA酶和RNA酶）。
9. 无水乙醇应使用分析纯及以上的纯度无水乙醇。
【备案信息】
备案人/生产企业名称：珠海艾博罗生物技术股份有限公司
住所：珠海市高新区中珠南路1号7栋402房
生产地址：珠海市高新区中珠南路1号7栋402房
售后服务单位：珠海艾博罗生物技术股份有限公司
电话：0756-2122850
地址：珠海市高新区创新海岸科技六路18号之一4层402
